?碘化丙啶PI染色液(50ug/ml)

产品货号：ZK-L0599

产品规格：10ml

产品简介：

碘化丙啶染色(PI stain)能够对细胞周期与细胞凋亡进行分析。。。。。。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种能够嵌合到双链DNA和RNA的碱基对中并与之结合的荧光染料，，，，，，无碱基特异性。。。。。。碘化丙啶与双链DNA结合后能够产生荧光，，，，，，并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。。。。。。细胞内的DNA被Propidium Iodide染色后，，，，，，能够用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定，，，，，，而后凭据DNA含量的散布情况，，，，，，能够进行细胞周期和细胞凋亡的分析。。。。。。碘化丙啶染色后，，，，，，如果G0/G1期细胞的荧光强度为1，，，，，，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，，，，，，在进行DNA复造的S期细胞的荧光强度为1～2之间。。。。。。凋亡细胞由于细胞核产生浓缩以及产生DNA片段化(DNA fragmentation)导致部门基因组DNA片段在染色过程中迷失，，，，，，因而凋亡细胞碘化丙啶染色后出现显著的弱染，，，，，，即荧光强度幼于1，，，，，，在流式检测的荧光图上出现所谓的sub-G1峰，，，，，，即凋亡细胞峰。。。。。。

细胞凋亡时，，，，，，流式细胞检测可出现亚二倍体核型的特点，，，，，，凭据光散射的特点，，，，，，PI染色能够分辨细胞凋亡和细胞坏死的细胞峰型。。。。。。细胞凋亡时，，，，，，出现凋亡细胞皱缩、染色质浓缩、核碎裂，，，，，，产生凋亡幼体，，，，，，使细胞的前向光散射低于正常。。。。。。在细胞凋亡的早期，，，，，，细胞对前向角光散射的能力显著降低，，，，，，对侧向光散射的能力增长或没有变动。。。。。。在细胞凋亡的晚期，，，，，，前向和侧向光散射的信号均降低。。。。。。细胞坏死时细胞多阐发为细胞肿胀，，，，，，因而前向光散射高于正常，，，，，，对侧向光散射高于正常。。。。。。

碘化丙啶PI染色液(50μg/ml)重要由PI、破膜剂等组成，，，，，，时时用于造就的贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测，，，，，， 亦可用于分辨细胞凋亡和细胞坏死。。。。。。PI染色液工作浓度为20～50μg/ml，，，，，，不含RNase，，，，，，推荐用于RNA染色，，，，，，细胞检测含量领域通常为0.1～1×106之间。。。。。。

产品组成：

自备资料：

胰蛋白酶消化液

流式细胞仪

PBS

预冷固定液：预冷的70%乙醇或4%多聚甲醛

操作步骤(仅供参考)：

1、细胞样品的造备：

⑴贴壁细胞：

幼心网络细胞造就液到一个无菌离心管内备用。。。。。。

用胰蛋白酶消化细胞至能够被轻轻用移液管或枪头奏乐下来时，，，，，，参与前面网络的细胞造就液，，，，，，奏乐下所有的贴壁细胞，，，，，，并轻轻吹散细胞。。。。。。

网络上述细胞悬液到离心管内。。。。。。

4℃，，，，，，1000g离心3～5min，，，，，，使细胞沉到管底。。。。。。幼心汲取上清并抛弃，，，，，，可留约莫50μl造就液，，，，，，以免吸走细胞。。。。。。

参与约1ml提前预冷的PBS，，，，，，沉悬细胞，，，，，，并转移至1.5ml无菌离心管。。。。。。

4℃，，，，，，1000g 离心3～5min，，，，，，使细胞沉到管底。。。。。。

幼心汲取上清并抛弃，，，，，，可留约莫50μl PBS，，，，，，以免吸走细胞。。。。。。

轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，，，，，，预防细胞成团。。。。。。

⑵悬浮细胞：

4℃，，，，，，1000g离心3～5min，，，，，，使细胞沉到管底。。。。。。

幼心汲取上清并抛弃，，，，，，可留约莫50μl造就液，，，，，，以免吸走细胞。。。。。。

参与约1ml提前预冷的PBS，，，，，，沉悬细胞，，，，，，并转移至1.5ml无菌离心管。。。。。。

4℃，，，，，，1000g 离心3～5min，，，，，，使细胞沉到管底。。。。。。

幼心汲取上清并抛弃，，，，，，可留约莫50μl PBS，，，，，，以免吸走细胞。。。。。。

轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，，，，，，预防细胞成团。。。。。。

2、细胞的固定：参与1ml冰浴预冷70%乙醇中，，，，，，轻轻奏乐混匀，，，，，，4℃前提下固定2h或更长功夫。。。。。。4℃固定12～24h可能成效更佳。。。。。。

3、细胞的洗濯：

4℃，，，，，，1000g 离心3～5min，，，，，，使细胞沉到管底。。。。。。

幼心汲取上清并抛弃，，，，，，可留约莫50μl溶液，，，，，，以免吸走细胞。。。。。。

参与约1ml提前预冷的PBS，，，，，，沉悬细胞，，，，，，并转移至1.5ml无菌离心管。。。。。。

4℃，，，，，，1000g 离心3～5min，，，，，，使细胞沉到管底。。。。。。

幼心汲取上清并抛弃，，，，，，可留约莫50μl PBS，，，，，，以免吸走细胞。。。。。。

轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，，，，，，预防细胞成团。。。。。。

PI染色：在每个待检细胞样品中参与500μl配造好的PI染色工作液，，，，，，轻轻沉悬细胞沉淀，，，，，，置于37℃避光水浴30min。。。。。。在24h内进行染色或流式细胞仪分析。。。。。。

5、检测与分析：用流式细胞仪在引发波长488nm波利益检测红色荧光，，，，，，同时检测光散射情况。。。。。。选取适当分析软件进行细胞DNA或RNA含量分析和光散射分析。。。。。。

染色了局：凋亡细胞G1峰左侧出现亚二倍体细胞群的峰型，，，，，，在光散射谱上，，，，，，前向光散射低于正常，，，，，，侧向光散射高于正常。。。。。。

当苦衷项：

荧光染料都存在淬灭的问题，，，，，，建议染色后尽快检测。。。。。。

为减缓荧光淬灭能够使用抗荧光淬灭封片液。。。。。。

在为了获得细胞沉淀的离心的过程中，，，，，，对于特殊细胞，，，，，，若是细胞沉淀不充分，，，，，，能够适当提高离心力或耽搁离心功夫。。。。。。

若是用于组织的细胞周期与细胞凋亡检测，，，，，，则必须把组织消化后，，，，，，造备成单细胞悬液，，，，，，能力够进行检测。。。。。。

细胞凋亡时，，，，，，凋亡细胞的标志之一是DNA可染行降低，，，，，，但这种情况并不是齐全的，，，，，，DNA含量的降低或者DNA与染料结合能力降落也会导致DNA可染行降低，，，，，，在分析的时辰应出格把稳。。。。。。

PI对人体有刺激性，，，，，，请把稳适当防护。。。。。。

为了您的安全和健全，，，，，，请穿尝试服并戴一次性手套操作。。。。。。

有效期： 6个月有效。。。。。。4℃, 1个月有效。。。。。。