?Hoechst33258/PI细胞凋亡染色试剂盒

产品货号：ZK-L0597

产品规格：100T

产品简介：

Hoechst33258/PI细胞凋亡染色试剂盒(Hoechst 33258/PI Apoptotis Assay Kit)是一种选取Hoechst 33258和碘化丙啶(Propidium Iodide，，，，，，，，PI)双荧光染色步骤进行细胞周期与细胞坏死分析的检测试剂盒。。。。。。单纯的PI染色可能观察DNA直方图上凋亡细胞的亚G1峰，，，，，，，，但只能代表G0/G1期产生凋亡，，，，，，，，无法观察S期和G2期产生的细胞凋亡，，，，，，，，并且细胞经过固定后无法对活细胞和死细胞进行分辨。。。。。。Hoechst 33258能够穿透细胞膜，，，，，，，，进入正常细胞和凋亡细胞与DNA结合，，，，，，，，能在紫表线下显示蓝色荧光，，，，，，，，并且染色后凋亡细胞荧光会比正常细胞显著加强。。。。。。PI不能穿透细胞膜，，，，，，，，对于拥有齐全细胞膜的正常细胞或凋亡细胞不能染色。。。。。。而对于坏死细胞，，，，，，，，其细胞膜的齐全性失落，，，，，，，，PI能够穿透细胞膜使坏死细胞着色产生红色荧光。。。。。。

Hoechst 33258/PI双染后，，，，，，，，可在流式细胞仪大将正常细胞、凋亡细胞和坏死细胞区别开来。。。。。。在二元直方图上，，，，，，，，正常细胞对Hoechst33258拥有拒染性，，，，，，，，呈弱蓝色荧光＋弱红色荧光(Hoechst 33258+/PI+)；；；；；凋亡细胞对Hoechst33258拥有嗜染性，，，，，，，，呈强蓝色荧光+弱红色荧光(Hoechst 33258++/PI+)；；；；；坏死细胞对PI拥有嗜染性，，，，，，，，呈弱蓝色荧光＋强红色荧光。。。。。。本试剂盒亦可用荧鲜明微镜进行观察，，，，，，，，检测细胞含量领域通常为0.1～1×106之间。。。。。。

产品组成：

自备资料：

胰蛋白酶消化液

流式细胞仪或荧鲜明微镜

PBS

细胞计数板

操作步骤(仅供参考)：

1、细胞样品的造备：

⑴贴壁细胞：

①幼心网络细胞造就液到一个无菌离心管内备用。。。。。。

②用胰蛋白酶消化细胞至细胞能够被轻轻用移液管或枪头奏乐下来时，，，，，，，，参与前面网络的细胞造就液，，，，，，，，奏乐下所有的贴壁细胞，，，，，，，，并轻轻吹散细胞。。。。。。

③网络上述细胞悬液到离心管内，，，，，，，，4℃ 1000g离心3～5min，，，，，，，，使细胞沉到管底，，，，，，，，幼心汲取上清并抛弃，，，，，，，，可留约莫50μl造就液，，，，，，，，以免吸走细胞。。。。。。

④参与约1ml提前预冷的PBS，，，，，，，，沉悬细胞，，，，，，，，并转移至1.5ml无菌离心管，，，，，，，，4℃ 1000g离心3～5min，，，，，，，，使细胞沉到管底。。。。。。

⑤幼心汲取上清并抛弃，，，，，，，，可留约莫50μl PBS，，，，，，，，以免吸走细胞。。。。。。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，，，，，，，，预防细胞成团。。。。。。

⑵悬浮细胞：

①4℃ 1000g离心3～5min，，，，，，，，使细胞沉到管底，，，，，，，，幼心汲取上清并抛弃，，，，，，，，可留约莫50μl造就液，，，，，，，，以免吸走细胞。。。。。。

②参与约1ml提前预冷的PBS，，，，，，，，沉悬细胞，，，，，，，，并转移至1.5ml无菌离心管，，，，，，，，4℃ 1000g离心3～5min，，，，，，，，使细胞沉到管底。。。。。。

③幼心汲取上清并抛弃，，，，，，，，可留约莫50μl PBS，，，，，，，，以免吸走细胞，，，，，，，，轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，，，，，，，，预防细胞成团。。。。。。

2、配造Cell Stain Buffer工作液：取适量Cell Stain Buffer(2×)与无菌去离子水或蒸馏水等比例混合，，，，，，，，即为Cell Stain Buffer工作液，，，，，，，，4℃保留备用。。。。。。

3、沉悬细胞：取上述网络好的0.1～1×106细胞，，，，，，，，参与0.9ml Cell Stain Buffer工作液，，，，，，，，沉悬细胞沉淀。。。。。。

4、Hoechst 33258/PI染色：

⑴一步法：参与5μl Hoechst 33258 Stain和5μl PI Stain，，，，，，，，轻轻混匀，，，，，，，， 置于冰浴或4℃，，，，，，，，孵育20～30min。。。。。。

⑵两步法：

①参与5μl Hoechst 33258 Stain，，，，，，，，置于37℃水浴，，，，，，，，孵育5～15min

②置于冰水中冷却后，，，，，，，，4℃ 1000g离心3～5min，，，，，，，，使细胞沉到管底，，，，，，，，弃上层染色液。。。。。。

③参与0.9ml Cell Stain Buffer工作液，，，，，，，，沉悬细胞沉淀。。。。。。

④参与5μl PI Stain，，，，，，，， 置于冰浴或4℃，，，，，，，，孵育20～30min。。。。。。

5、检测与分析：用流式细胞仪在引发波长400～500nm检测蓝色荧光，，，，，，，，在大于630nm处检测红色荧光，，，，，，，，同时检测光散射情况。。。。。。选取适当分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。。。。。。若是使用荧鲜明微镜检测，，，，，，，，检测前4℃ 1000g离心3～5min沉淀细胞，，，，，，，，用PBS洗涤一次，，，，，，，，再涂片观察红色荧光和蓝色荧光。。。。。。对于贴壁细胞使用荧鲜明微镜检测，，，，，，，，亦可不网络细胞，，，，，，，，弃造就液后直接顺次依照上述比例参与试剂(A)、试剂(B)、试剂(C)，，，，，，，，冰浴或4℃染色20～30min。。。。。。染色后PBS洗涤一次，，，，，，，，再在荧鲜明微镜下观察。。。。。。

染色了局：在蓝色荧光对红色荧光的散点图上，，，，，，，，正常细胞呈低蓝光/低红光，，，，，，，，凋亡细胞呈高蓝光/低红光，，，，，，，，坏死细胞呈低蓝光/高红光。。。。。。

当苦衷项：

荧光染料都存在淬灭的问题，，，，，，，，建议染色后尽快检测。。。。。。

在为了获得细胞沉淀的离心的过程中，，，，，，，，对于特殊细胞，，，，，，，，若是细胞沉淀不充分，，，，，，，，能够适当提高离心力或耽搁离心功夫。。。。。。

Heochst 33258与细胞孵育的功夫不宜过长，，，，，，，，通常节造在20min以内。。。。。。太长容易引起Heochst 33258的发射光谱由蓝光向红光迁徙，，，，，，，，导致红色荧光与兰色荧光的比例扭转。。。。。。

若是用于组织的细胞周期与细胞凋亡检测，，，，，，，，则必须把组织消化后，，，，，，，，造备成单细胞悬液，，，，，，，，能力够进行检测

PI对人体有刺激性，，，，，，，，请把稳适当防护。。。。。。

为了您的安全和健全，，，，，，，，请穿尝试服并戴一次性手套操作。。。。。。

有效期： 12个月有效。。。。。。4℃保留，，，，，，，，5～6个月有效。。。。。。