?碘化丙啶PI染色液(50ug/ml,含RNase)

产品货号：ZK-L0600

产品规格：10ml

产品简介：

碘化丙啶染色(PI stain)能够对细胞周期与细胞凋亡进行分析。。。。。。。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种能够嵌合到双链DNA和RNA的碱基对中并与之结合的荧光染料，，，，，，，无碱基特异性。。。。。。。碘化丙啶与双链DNA结合后能够产生荧光，，，，，，，并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。。。。。。。细胞内的DNA被Propidium Iodide染色后，，，，，，，能够用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定，，，，，，，而后凭据DNA含量的散布情况，，，，，，，能够进行细胞周期和细胞凋亡的分析。。。。。。。碘化丙啶染色后，，，，，，，如果G0/G1期细胞的荧光强度为1，，，，，，，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，，，，，，，在进行DNA复造的S期细胞的荧光强度为1～2之间。。。。。。。凋亡细胞由于细胞核产生浓缩以及产生DNA片段化(DNA fragmentation)导致部门基因组DNA片段在染色过程中迷失，，，，，，，因而凋亡细胞碘化丙啶染色后出现显著的弱染，，，，，，，即荧光强度幼于1，，，，，，，在流式检测的荧光图上出现所谓的sub-G1峰，，，，，，，即凋亡细胞峰。。。。。。。

细胞凋亡时，，，，，，，流式细胞检测可出现亚二倍体核型的特点，，，，，，，凭据光散射的特点，，，，，，，PI染色能够分辨细胞凋亡和细胞坏死的细胞峰型。。。。。。。细胞凋亡时，，，，，，，出现凋亡细胞皱缩、染色质浓缩、核碎裂，，，，，，，产生凋亡幼体，，，，，，，使细胞的前向光散射低于正常。。。。。。。在细胞凋亡的早期，，，，，，，细胞对前向角光散射的能力显著降低，，，，，，，对侧向光散射的能力增长或没有变动。。。。。。。在细胞凋亡的晚期，，，，，，，前向和侧向光散射的信号均降低。。。。。。。细胞坏死时细胞多阐发为细胞肿胀，，，，，，，因而前向光散射高于正常，，，，，，，对侧向光散射高于正常。。。。。。。

碘化丙啶PI染色液(50μg/ml,含RNase)重要由PI、破膜剂、RNase等组成，，，，，，，时时用于造就的贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测，，，，，，， 亦可用于分辨细胞凋亡和细胞坏死。。。。。。。 PI染色液工作浓度为20～50μg/ml，，，，，，，推荐用于DNA染色，，，，，，，细胞检测含量领域通常为0.1～1×106之间。。。。。。。

产品组成：

自备资料：

1、 胰蛋白酶消化液

2、 流式细胞仪

3、 PBS

4、 预冷固定液：预冷的70%乙醇或4%多聚甲醛

操作步骤(仅供参考)：

1、细胞样品的造备：

⑴贴壁细胞：

① 幼心网络细胞造就液到一个无菌离心管内备用。。。。。。。

② 用胰蛋白酶消化细胞至能够被轻轻用移液管或枪头奏乐下来时，，，，，，，参与前面网络的细胞造就液，，，，，，，奏乐下所有的贴壁细胞，，，，，，，并轻轻吹散细胞。。。。。。。

③ 网络上述细胞悬液到离心管内。。。。。。。

④ 4℃，，，，，，，1000g离心3～5min，，，，，，，使细胞沉到管底。。。。。。。幼心汲取上清并抛弃，，，，，，，可留约莫50μl造就液，，，，，，，以免吸走细胞。。。。。。。

⑤ 参与约1ml提前预冷的PBS，，，，，，，沉悬细胞，，，，，，，并转移至1.5ml无菌离心管。。。。。。。

⑥ 4℃，，，，，，，1000g 离心3～5min，，，，，，，使细胞沉到管底。。。。。。。

⑦ 幼心汲取上清并抛弃，，，，，，，可留约莫50μl PBS，，，，，，，以免吸走细胞。。。。。。。

⑧ 轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，，，，，，，预防细胞成团。。。。。。。

⑵悬浮细胞：

① 4℃，，，，，，，1000g离心3～5min，，，，，，，使细胞沉到管底。。。。。。。

② 幼心汲取上清并抛弃，，，，，，，可留约莫50μl造就液，，，，，，，以免吸走细胞。。。。。。。

③ 参与约1ml提前预冷的PBS，，，，，，，沉悬细胞，，，，，，，并转移至1.5ml无菌离心管。。。。。。。

④ 4℃，，，，，，，1000g 离心3～5min，，，，，，，使细胞沉到管底。。。。。。。

⑤ 幼心汲取上清并抛弃，，，，，，，可留约莫50μl PBS，，，，，，，以免吸走细胞。。。。。。。

⑥ 轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，，，，，，，预防细胞成团。。。。。。。

2、细胞的固定：参与1ml冰浴预冷70%乙醇中，，，，，，，轻轻奏乐混匀，，，，，，，4℃前提下固定2h或更长功夫。。。。。。。4℃固定12～24h可能成效更佳。。。。。。。

3、细胞的洗濯：

① 4℃，，，，，，，1000g 离心3～5min，，，，，，，使细胞沉到管底。。。。。。。

② 幼心汲取上清并抛弃，，，，，，，可留约莫50μl溶液，，，，，，，以免吸走细胞。。。。。。。

③ 参与约1ml提前预冷的PBS，，，，，，，沉悬细胞，，，，，，，并转移至1.5ml无菌离心管。。。。。。。

④ 4℃，，，，，，，1000g 离心3～5min，，，，，，，使细胞沉到管底。。。。。。。

⑤ 幼心汲取上清并抛弃，，，，，，，可留约莫50μl PBS，，，，，，，以免吸走细胞。。。。。。。

⑥ 轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，，，，，，，预防细胞成团。。。。。。。

4、 PI染色：在每个待检细胞样品中参与500μl配造好的PI染色工作液，，，，，，，轻轻沉悬细胞沉淀，，，，，，，置于37℃避光水浴30min。。。。。。。在24h内进行染色或流式细胞仪分析。。。。。。。

5、检测与分析：用流式细胞仪在引发波长488nm波利益检测红色荧光，，，，，，，同时检测光散射情况。。。。。。。选取适当分析软件进行细胞DNA或RNA含量分析和光散射分析。。。。。。。

染色了局：凋亡细胞G1峰左侧出现亚二倍体细胞群的峰型，，，，，，，在光散射谱上，，，，，，，前向光散射低于正常，，，，，，，侧向光散射高于正常。。。。。。。

当苦衷项：

1、 荧光染料都存在淬灭的问题，，，，，，，建议染色后尽快检测。。。。。。。

2、 为减缓荧光淬灭能够使用抗荧光淬灭封片液。。。。。。。

3、 在为了获得细胞沉淀的离心的过程中，，，，，，，对于特殊细胞，，，，，，，若是细胞沉淀不充分，，，，，，，能够适当提高离心力或耽搁离心功夫。。。。。。。

4、 若是用于组织的细胞周期与细胞凋亡检测，，，，，，，则必须把组织消化后，，，，，，，造备成单细胞悬液，，，，，，，能力够进行检测。。。。。。。

5、 细胞凋亡时，，，，，，，凋亡细胞的标志之一是DNA可染行降低，，，，，，，但这种情况并不是齐全的，，，，，，，DNA含量的降低或者DNA与染料结合能力降落也会导致DNA可染行降低，，，，，，，在分析的时辰应出格把稳。。。。。。。

6、 PI对人体有刺激性，，，，，，，请把稳适当防护。。。。。。。

7、 为了您的安全和健全，，，，，，，请穿尝试服并戴一次性手套操作。。。。。。。

有效期： 6个月有效。。。。。。。4℃, 1个月有效。。。。。。。