?细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)

产品货号：ZK-L0610

产品规格：100T

产品简介：

自噬(autophagy)是细胞受到刺激后吞噬自身的细胞质或细胞器，，，，，最终将吞食品在溶酶体内降解的过程，，，，，自噬体(autophagosome)为双层膜包被的圆形或椭圆形结构，，，，，内含细胞质、长命蛋白质和异常蛋白荟萃物，，，，，危险或有余细胞器如线粒体、粗面内质网和微体、病毒和细菌等。。。。。。。。自噬是一种进化上守旧的降解过程，，，，，可靶向长命命蛋白、细胞器及其他细胞质组分并通过溶酶体蹊径进行降解。。。。。。。。自噬通路的激活对多种细胞职能都是必须的，，，，，蕴含饥饿状态下的存活、细胞内组分断根、发育及免疫等过程。。。。。。。。

单丹磺酰尸胺(Dansylcadaverine,MDC )是一种荧光色素，，，，，是嗜酸性染色剂，，，，，通常被用于检测自噬体形成的特异性象征染色剂，，，，，其检测引发滤光片波长355nm，，，，，阻断滤光片波长512nm。。。。。。。。Leagene细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)合用于造就细胞的自噬染色，，，，，又称为MDC染色液，，，，，可与EB合用双染。。。。。。。。

产品组成：

自备资料：

低速离心理

1.5ml离心管

载玻片、盖玻片

荧鲜明微镜

操作步骤(仅供参考)：

(一)玻片法

网络细胞，，，，，用300～500μl的Wash buffer洗濯细胞1次，，，，，800～1000g离心5min，，，，，弃上清。。。。。。。。

参与适量的Stain buffer沉悬细胞，，，，，计数并调节细胞浓度至106/ml。。。。。。。。

取5μl MDC Stain(500×)加至245μl Stain buffer，，，，，混匀，，，，，即为MDC Stain(10×)。。。。。。。。 

取90μl细胞悬液至新的1.5ml离心管中，，，，，参与10μl的MDC Stain(10×)，，，，，轻轻混匀。。。。。。。。

37℃或室温避光染色15～45min。。。。。。。。

800～1000g离心5min，，，，，弃上清，，，，，网络细胞，，，，，用300～500μl的Wash buffer洗濯细胞2次，，，，，800～1000g离心5min，，，，，弃上清。。。。。。。。

参与100μl的Wash buffer沉悬细胞，，，，，滴加于载玻片上并加盖玻片。。。。。。。。

荧鲜明微镜下观察(引发滤光片波长355nm，，，，，阻断滤光片波长512nm)，，，，，计数并拍照。。。。。。。。

(二)96孔板法

1、 配造MDC染色工作液：按MDC Stain(500×)：Stain buffer=1：499的比例混合，，，，，即为MDC染色工作液。。。。。。。。如不能实时用完，，，，，应-20℃避光保留。。。。。。。。

2、 轻轻吸除96孔板中的造就液，，，，，参与100μl MDC染色工作液至各孔，，，，，37℃ 5%CO2避光孵育15～60min。。。。。。。。

3、 各孔参与100μl Wash buffer洗濯2～3次。。。。。。。。

4、 荧鲜明微镜下观察(引发滤光片波长355nm，，，，，阻断滤光片波长512nm)，，，，，计数并拍照。。。。。。。。

(三)MDC与EB双染法

1、 网络细胞，，，，，用300～500μl的Wash buffer洗濯细胞1次，，，，，800～1000g离心5min，，，，，弃上清。。。。。。。。

2、 参与适量的Stain buffer沉悬细胞，，，，，计数并调节细胞浓度至106/ml。。。。。。。。

3、 取5μl MDC Stain(500×)加至245μl Stain buffer，，，，，混匀，，，，，即为MDC Stain(10×)

4、 取90μl细胞悬液至新的1.5ml离心管中，，，，，参与10μl的MDC Stain(10×)和0.2uM EB染色液，，，，，轻轻混匀。。。。。。。。

5、 滴加于在玻片上，，，，，室温避光染色15～30min，，，，，加盖玻片。。。。。。。。

6、 荧鲜明微镜下观察(引发滤光片波长512nm)，，，，，计数并拍照。。。。。。。。

染色了局：

当苦衷项：

MDC Stain和EB对人体有害处，，，，，请幼心操作。。。。。。。。

AO常与EB染色合用，，，，，可分辨出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。。。。。。。。

操作过程中该把稳削减试剂露出于强光下的功夫。。。。。。。。

有效期： 12个月有效。。。。。。。。