?细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒

产品货号：ZK-L0603

产品规格：50T

产品简介：

细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒(Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit)是一种选取经典的碘化丙啶染色(PI staining)步骤进行细胞周期与细胞凋亡分析的检测试剂盒。。。。。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种能够嵌合到双链DNA和RNA的碱基对中并与之结合的荧光染料，，，，，无碱基特异性。。。。。碘化丙啶与双链DNA结合后能够产生荧光，，，，，并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。。。。。细胞内的DNA被Propidium Iodide染色后，，，，，能够用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定，，，，，而后凭据DNA含量的散布情况，，，，，能够进行细胞周期和细胞凋亡的分析。。。。。碘化丙啶染色后，，，，，如果G0/G1期细胞的荧光强度为1，，，，，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，，，，，在进行DNA复造的S期细胞的荧光强度为1～2之间。。。。。凋亡细胞由于细胞核产生浓缩以及产生DNA片段化(DNA fragmentation)导致部门基因组DNA片段在染色过程中迷失，，，，，因而凋亡细胞碘化丙啶染色后出现显著的弱染，，，，，即荧光强度幼于1，，，，，在流式检测的荧光图上出现所谓的sub-G1峰，，，，，即凋亡细胞峰。。。。。

细胞凋亡时，，，，，流式细胞检测可出现亚二倍体核型的特点，，，，，凭据光散射的特点，，，，，PI染色能够分辨细胞凋亡和细胞坏死的细胞峰型。。。。。细胞凋亡时，，，，，出现凋亡细胞皱缩、染色质浓缩、核碎裂，，，，，产生凋亡幼体，，，，，使细胞的前向光散射低于正常。。。。。在细胞凋亡的早期，，，，，细胞对前向角光散射的能力显著降低，，，，，对侧向光散射的能力增长或没有变动。。。。。在细胞凋亡的晚期，，，，，前向和侧向光散射的信号均降低。。。。。细胞坏死时细胞多阐发为细胞肿胀，，，，，因而前向光散射高于正常，，，，，对侧向光散射高于正常。。。。。

  Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit时时用于造就的贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测，，，，，亦可用于分辨细胞凋亡和细胞坏死。。。。。该试剂盒检测细胞含量领域通常为0.1～1×106之间。。。。。

产品组成：

自备资料：

胰蛋白酶消化液

流式细胞仪

PBS

预冷固定液：预冷的70%乙醇或4%多聚甲醛

操作步骤(仅供参考)：

1、细胞样品的造备：

⑴贴壁细胞：

①幼心网络细胞造就液到一个无菌离心管内，，，，，用胰蛋白酶消化细胞至能够被轻轻用移液管或枪头奏乐下来时，，，，，参与前面网络的细胞造就液，，，，，奏乐下所有的贴壁细胞，，，，，并轻轻吹散细胞。。。。。

②网络上述细胞悬液到离心管内，，，，，4℃ 1000g离心3～5min，，，，，使细胞沉到管底，，，，，幼心汲取上清并抛弃，，，，，可留约莫50μl造就液，，，，，以免吸走细胞。。。。。

③参与约1ml提前预冷的PBS，，，，，沉悬细胞，，，，，并转移至1.5ml无菌离心管，，，，，4℃ 1000g离心3～5min，，，，，使细胞沉到管底。。。。。

④幼心汲取上清并抛弃，，，，，可留约莫50μl PBS，，，，，以免吸走细胞，，，，，轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，，，，，预防细胞成团。。。。。

⑵悬浮细胞：

①4℃ 1000g离心3～5min，，，，，使细胞沉到管底幼心汲取上清并抛弃，，，，，可留约莫50μl造就液，，，，，以免吸走细胞。。。。。

②参与约1ml提前预冷的PBS，，，，，沉悬细胞，，，，，并转移至1.5ml无菌离心管，，，，，4℃ 1000g离心3～5min，，，，，使细胞沉到管底。。。。。

③幼心汲取上清并抛弃，，，，，可留约莫50μl PBS，，，，，以免吸走细胞，，，，，轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，，，，，预防细胞成团。。。。。

2、细胞的固定：参与1ml冰浴预冷70%乙醇中，，，，，轻轻奏乐混匀，，，，，4℃前提下固定2h或更长功夫。。。。。4℃固定12～24h可能成效更佳。。。。。

3、细胞的洗濯：

①4℃ 1000g离心3～5min，，，，，使细胞沉到管底，，，，，幼心汲取上清并抛弃，，，，，可留约莫50μl溶液，，，，，以免吸走细胞。。。。。

②参与约1ml提前预冷的PBS，，，，，沉悬细胞，，，，，并转移至1.5ml无菌离心管，，，，，4℃ 1000g离心3～5min，，，，，使细胞沉到管底。。。。。

③幼心汲取上清并抛弃，，，，，可留约莫50μl PBS，，，，，以免吸走细胞，，，，，轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，，，，，预防细胞成团。。。。。

4、PI染色：

一步法：

①配造PI染色工作液：凭据待检样品的数量，，，，，取适量试剂(A)、试剂(B)、试剂(C)混合形成PI染色工作液，，，，，以下表配造。。。。。配造好的PI染色工作液4℃避光保留待用，，，，，24h有效。。。。。

②在每个待检细胞样品中，，，，， 参与500μl配造好的PI染色工作液，，，，，轻轻沉悬细胞沉淀，，，，， 置于37℃避光水浴30min。。。。。

两步法：

①在沉淀细胞中参与40μl PBS和10μl RNase A Solution(50×)，，，，，置于37℃水浴30min。。。。。

②配造PI染色工作液：凭据待检样品的数量，，，，，取适量试剂(A)、试剂(B)混合形成PI染色工作液，，，，，以下表配造。。。。。配造好的PI染色工作液4℃避光保留待用，，，，，24h有效。。。。。

③在每个待检细胞样品中，，，，， 参与500μl配造好的PI染色工作液，，，，，轻轻沉悬细胞沉淀，，，，， 置于4℃避光30min。。。。。

5、检测与分析：用流式细胞仪在引发波长488nm波利益检测红色荧光，，，，，同时检测光散射情况，，，，，选取适当分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。。。。。

染色了局：凋亡细胞G1峰左侧出现亚二倍体细胞群的峰型，，，，，在光散射谱上，，，，，前向光散射低于正常，，，，，侧向光散射高于正常。。。。。

当苦衷项：

荧光染料都存在淬灭的问题，，，，，建议染色后尽快检测。。。。。

为减缓荧光淬灭能够使用抗荧光淬灭封片液。。。。。

在为了获得细胞沉淀的离心的过程中，，，，，对于特殊细胞，，，，，若是细胞沉淀不充分，，，，，能够适当提高离心力或耽搁离心功夫。。。。。

若是用于组织的细胞周期与细胞凋亡检测，，，，，则必须把组织消化后，，，，，造备成单细胞悬液，，，，，能力够进行检测。。。。。

细胞凋亡时，，，，，凋亡细胞的标志之一是DNA可染行降低，，，，，但这种情况并不是齐全的，，，，，DNA含量的降低或者DNA与染料结合能力降落也会导致DNA可染行降低，，，，，在分析的时辰应出格把稳。。。。。

PI对人体有刺激性，，，，，请把稳适当防护。。。。。

为了您的安全和健全，，，，，请穿尝试服并戴一次性手套操作。。。。。

有效期： 12个月有效。。。。。亦可4℃保留, 1个月有效。。。。。