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乐投letou生物报路:在适应性免疫系统中,,,,,,,,由B淋巴细胞产生的多样性的抗体分子是介导体液免疫的关键性效应分子,,,,,,,,因而,,,,,,,,抗体分子的多样性对适应性免疫是至关沉要的。。。。。唬唬;;;;逶诳乖碳は拢,,,,,,B淋巴细胞特异性表白的胞嘧啶脱氨酶AID可能靶向抗体分子产生法式性的DNA危险,,,,,,,,介导抗体类型转换(CSR)以及体细胞高频突变(SHM)的产生,,,,,,,,从而产生拥有更高亲和力的多样性抗体库。。。。。
临床发现AID蛋白的突变与免疫缺点疾病2型高IgM综合征亲昵有关,,,,,,,,并且这些突变多为隐性遗传,,,,,,,,然而有一类C端缺失突变体AIDDC阐发为显性失活效应。。。。。仍拥有胞嘧啶脱氨酶活性的AIDDC由于短缺C端的出核信号而在细胞核内富集,,,,,,,,却难以介导CSR事务的产生。。。。。那么,,,,,,,,AIDDC在抗体基因靶点的脱氨酶活性是若何被抑造的呢,,,,,,,,以及AIDDC又是若何影响野生型AID的职能从而导致显性失活的呢??????这其中的致病机理,,,,,,,,一向是该钻研领域悬而未决的难题。。。。。
2022年4月26日,,,,,,,,北京大学性命科学学院、北大-清华性命科学结合中心胡家志钻研员课题组与中国科学院分子细胞科学卓越创新中心(生物化学与细胞生物学钻研所)孟飞龙钻研员课题组合作,,,,,,,,在The EMBO Journal杂志在线颁发题为“C-terminal deletion-induced condensation sequesters AID from IgH targets inimmunodeficiency”的钻研论文。。。。。在这项钻研中,,,,,,,,钻研人员揭示了AIDDC在细胞核内荟萃进而导致AIDDC不能高效地被招募到抗体基因IgH区域;;;;;;;此表,,,,,,,,该钻研还引入蛋白质共凝聚的概想,,,,,,,,奇妙地阐了然AIDDC突变体通过捕获细胞核内游离的野生型AID形成共凝聚体,,,,,,,,从而抑造野生型AID靶向抗体基因的过程,,,,,,,,造成显性失活效应的致病机理(Dominant-negative effect;;;;;;;图1)。。。。。这也是率先从凝聚体的角度来分解显性负突变可能的致病机造。。。。。

图1. AID/AIDDC共凝聚导致免疫缺点疾病的工作模型。。。。。在B淋巴细胞内,,,,,,,,野生型的AID可能通过自身位于N端的入核信号而进入到细胞质内从而靶向到IgH区域,,,,,,,,介导抗体类型转换和体细胞高频突变的产生;;;;;;;而当细胞内含有单个AID的C端缺失突变体AIDDC时,,,,,,,,野生型的AID会被AIDDC与其他无膜细胞器共同形成的凝聚体捕获而进入到凝聚体内,,,,,,,,因而难以进入到IgH区域介导后续抗体类型转换和体细胞高频突变事务的产生
钻研人员通过内源蛋白象征以及CRISPR-Sirius靶向的伎俩,,,,,,,,发现AIDDC在B淋巴细胞内以凝聚体的大局存在,,,,,,,,且这种凝聚体被断绝在IgH区域之表,,,,,,,,失去了靶向抗体基因的能力(图2A)。。。。。为证实这种蛋白凝聚体的形成是导致AIDDC不能肇始CSR的原因,,,,,,,,钻研人员将拥有形成凝聚体能力的FUS蛋白偶联在野生型AID的结尾,,,,,,,,发现野生型AID蛋白也拥有了形成凝聚体的能力(图2B)。。。。。与此同时,,,,,,,,这种凝聚体的形成极大地降低了野生型AID-FUS蛋白介导的CSR事务产生频率(图2C)。。。。。这批注,,,,,,,,蛋白凝聚体的形成是导致AIDDC不能靶向抗体基因区域并阐发为免疫缺点的原因。。。。。

图2. AIDDC形成的凝聚体与IgH区域断绝从而抑造CSR的产生。。。。。A)通过CRISPR-Sirius靶向系统象征内源AIDDC-GFP蛋白与抗体靶向基因IgH区域的定位;;;;;;;B)AID-FUS-GFP及其突变体在激活的原代B淋巴细胞内的定位和散布图;;;;;;;C)FACS分析AID-FUS及其突变体介导的抗体类型从IgM转换为IgG1的比例
通过细胞内共表白尝试,,,,,,,,钻研人员发现,,,,,,,,AIDDC凝聚体可能特异性地捕获细胞核内游离的野生型AID进入到凝聚体内(图3A)。。。。。他们引入“optoDroplet”系统,,,,,,,,验证了AID蛋白N端的12aa序列以及位于AID的催化活性区域的4个精氨酸序列对于AIDDC形成凝聚体极度沉要(图3B)。。。。。当AIDDC或其他突变体与野生型AID蛋白共表白时,,,,,,,,钻研人员发现AID/AIDDC凝聚体可能显著降低野生型AID介导抗体类型转换的能力(图3C)。。。。。

图3. AID/AIDDC共凝聚导致显性失活效应。。。。。A)过表白AID及AIDR190X在early G1期的CH12F3细胞中荧光成像,,,,,,,,AID与AIDR190X在核内形成共凝聚体;;;;;;;B)AID的N端无序序列和表表正电荷片区拥有驱动蛋白凝聚的能力;;;;;;;C)突变驱动蛋白凝聚的N端序列或表表正电荷片区均可回补AIDR190X引发的显性失活效应
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