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乐投letou生物报路:9月28日,,,,,,,,Metabolic Engineering Communications期刊在线颁发了中国科学院分子植物科学卓越创新中心王勇钻研组题为“Diversion of metabolic flux towards 5-deoxy(iso)flavonoid production via enzyme self-assembly in Escherichia coli”的钻研论文,,,,,,,,该钻研利用蛋白自组装战术实现了大肠杆菌中5-脱氧类黄酮甘草素的生物合成。。。。。。
黄酮是拥有C6-C3-C6结构的多酚类物质,,,,,,,,是植物在持久天然选择过程中产生的一类次级代谢产品,,,,,,,,拥有多种生理职能,,,,,,,,在医药、食品及保健品领域拥有宽泛地利用价值。。。。。。凭据A环C5位是否存在羟基,,,,,,,,黄酮类化合物可分为C5-羟基类黄酮及C5-脱氧类黄酮两大类。。。。。。前者宽泛存在于各类植物体内,,,,,,,,而后者较为罕见,,,,,,,,重要存在于豆科植物中。。。。。。近年来,,,,,,,,5-脱氧类黄酮在医药、保健品和食品增长剂等方面的潜在利用引起了人们的宽泛关注,,,,,,,,鉴于其在植物中的散布较少,,,,,,,,利用工程微生物异源合成是大量廉价获取该类化合物的代替规划。。。。。。
在本工作中,,,,,,,,作者通过基因组信息挖掘了甘草中的查尔酮还原酶(CHR)基因,,,,,,,,在大肠杆菌中构建了5-脱氧类黄酮甘草素的合成蹊径。。。。。。但该菌株的发酵产品堆集了大量的5-羟基类黄酮柙欷素,,,,,,,,甘草素产量仅为柙欷素的1/4。。。。。。这与植物中天然存在的情景类似。。。。。。为了优化甘草素的合成,,,,,,,,作者利用分歧植物起源查尔酮合成酶(CHS)与CHR进行正交筛。。。。。。,,,,,,,发现起源于大豆(Glycine max)的查耳酮合酶GmCHS7和来自于甘草(Glycyrrhizza uralensis)的查尔酮还原酶GuCHR,,,,,,,,组合后能够将甘草素比例从39.7% 提高到 50.3%。。。。。。为进一步增长产品中甘草素的比例,,,,,,,,钻研人员开发出一种挨次自组装酶反映器,,,,,,,,利用相互作用的蛋白对(PDZ和PDZ ligand)将GmCHS7和GuCHR进行双酶自组装,,,,,,,,借此较少中央体扩散及传递功夫,,,,,,,,从而使反映优先流向甘草素方向。。。。。。该战术有效推进了甘草素的天生,,,,,,,,使产品中甘草素的比例提高到55%,,,,,,,,合成产量达到45 mg/L。。。。。。
为进一步提高总碳代谢通量,,,,,,,,选取GmCHS7、GuCHR和来自于苜蓿(Medicago sativa)的MsCHI三种催化挨次的化学计量分列对15种蛋白质支架进行了设计,,,,,,,,使总黄酮产量增长1.4倍,,,,,,,,在摇瓶中从69.4 mg/L增长到97.0 mg/L。。。。。。该蛋白的自组装战术也提高了大肠杆菌谱系特异性化合物7,4 ' -二羟基黄酮和大豆苷元的产量和方向。。。。。。本钻研为微生物出产拥有附加值的5-脱氧黄酮类化合物提供了基础。。。。。。
中国科学院分子植物科学卓越创新中心李建华博士和河南大学硕士生许方琳为该论文并列第一作者。。。。。。中国科学院分子植物科学卓越创新中心王勇钻研员为通讯作者。。。。。。该钻研工作得到国度沉点研发打算、国度天然基金、上海市优良学术带头人打算、中科院战术性先导科技专项等项主张赞助。。。。。。

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