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基于PCR的CRISPR-Cas13a高活络高特异乙肝病毒及其耐药突变检测新步骤


乐投letou生物报路:解放军疾病预防节造中心宋宏彬钻研员团队利用LwCas13a结合PCR扩增技术成立了乙肝病毒DNA及其常见耐药突变YMDD检测新步骤PCR-CRISPR, ,,,,, ,该技术为乙肝病毒尤其是低病毒载量样本的高效检测提供了有力工具。。。。。。


慢性乙型肝炎是目前最凸起的全球性公共卫生问题之一, ,,,,, ,严沉威胁人类健全。。。。。。只管乙肝疫苗的使用有效降低了乙肝的发病率, ,,,,, ,每年仍有1-3千万人习染乙肝病毒, ,,,,, ,约有1百万人死于乙肝习染及其并发症。。。。。。
近年来, ,,,,, ,新的RNA靶向技术CRISPR-Cas13a已被开发为一种可检测痕量核酸的高活络、高特异性检测技术, ,,,,, ,通过结合RPA等温扩增技术可实现对单拷贝核酸和单碱基突变的正确检测和鉴定。。。。。?????翁庾榻俅布觳庵惺褂迷椒⒖矸旱腜CR扩增技术与Cas13a相结合, ,,,,, ,设计别离针对乙肝病毒DNA及YMDD耐药突变的特异性crRNA, ,,,,, ,实现了对低至单拷贝的HBV DNA及YMDD耐药突变的高活络度检测。。。。。。
血清样本检测了局显示, ,,,,, ,新成立的PCR-CRISPR步骤和数字PCR在10例qPCR判定为阴性的血清样本中检测出HBV DNA, ,,,,, ,批注该技术对HBV DNA检测的活络度显著高于qPCR。。。。。。在针对YMDD耐药突变的检测中, ,,,,, ,PCR-CRISPR在12例HBV DNA浓度低于100IU/mL的血清样本中检测出了qPCR和直接测序法均未检测到的YMDD耐药突变(4例YVDD和8例YIDD), ,,,,, ,充分批注该技术活络度较qPCR高, ,,,,, ,且更合用于低浓度HBV DNA样本的检测。。。。。。
PCR-CRISPR技术实现了低载量HBV样本中病毒核酸和YMDD耐药突变的高活络检测, ,,,,, ,对于降低输血和肝移植中HBV习染的风险、削减抗病毒医治停药后的乙肝复发率等拥有沉要的临床领导意思。。。。。。该钻研颁发在今年近期出版的国际专业学术期刊《Clinical Microbiology and Infection》上。。。。。。


原文检索:
Highly sensitive and specific detection of HBV DNA and drug resistance mutations utilizing the PCR-based CRISPR-Cas13a system

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