丽江乐投letou生物报路：2019年1月8日，，，，，，北京大学化学与分子工程学院、清华-北大性命科学结合中心陈兴课题组在Nature Chemical Biology杂志在线颁发了题为“Legionella effector SetA as a general O-glucosyltransferase for eukaryotic proteins”（DOI: 10.1038/s41589-018-0189-y）的钻研论文，，，，，，报路通过化学酶法象征战术，，，，，，实现了对嗜肺军团菌效应蛋白糖基转移酶SetA的蛋白底物鉴定，，，，，，并阐了然SetA的底物选择机理，，，，，，为糖蛋白的人为合成提供了一种有力的工具。。。。。

糖基化建饰是一种宽泛存在且沉要的蛋白质翻译后建饰，，，，，，由糖基转移酶催化形成。。。。？？？？？固濉⒁呙绲群芏嗔俅惨街涡缘鞍字识加涤刑匾煨蕴腔ㄊ，，，，，，且对蛋白活性至关沉要。。。。。唬；；；谔腔泼傅幕阜ê铣刹街，，，，，，是获得均一糖蛋白的有效伎俩之一。。。。。因而，，，，，，找寻性质良好的各类糖基转移酶极度关键。。。。。对比真核细胞，，，，，，细菌起源的糖基转移酶拥有易表白纯化和催化产率高蹬着良性质，，，，，，常被刷新为人为合成糖蛋白的工具酶。。。。。然而，，，，，，蛋白O-衔接糖基化建饰在原核生物与真核生物之间并不守旧，，，，，，这成为了利用细菌糖基化系统出产真核生物O-糖蛋白的一大瓶颈。。。。。为相识决这个问题，，，，，，陈兴教授课题组对病原菌-宿主相互作用中的蛋白质糖基化进行了索求。。。。。

某些病原菌入侵宿主细胞后，，，，，，会排泄拥有糖基转移酶活性的效应蛋白。。。。。这些效应蛋白往往利用宿主的糖供体，，，，，，并且建饰宿主的靶蛋白。。。。。因而，，，，，，对这类糖基转移酶的工程化，，，，，，可为实现真核生物O-糖蛋白的合成提供新的有效战术。。。。。嗜肺军团菌效应蛋白SetA拥有O-葡萄糖转移酶活性，，，，，，然而其底物蛋白尚未被鉴定。。。。。陈兴课题组首先开发了可能实现特异性象征和选择性富集的化学酶法战术。。。。。他们设计被SetA利用的生物正交基团建饰的糖供体（尿苷二磷酸-6-叠氮-葡萄糖，，，，，，UDP-6AzGlc），，，，，，将叠氮葡萄糖6AzGlc转移至底物蛋白。。。。。通过点击化学反映，，，，，，与可切割生物素探针衔接，，，，，，实现对底物蛋白的选择性富集和位点特异性质谱鉴定(下图)。。。。。质谱分析鉴定到散布于276个蛋白的317个O-glucose建饰位点。。。。。天然糖供体象征及军团菌侵染尝试，，，，，，验证了SetA能够建饰多多的底物蛋白。。。。。

进一步钻研发现被建饰蛋白拥有S/T#-X-L-P/G (#为建饰氨基酸)序列守旧性。。。。。主题催化结构域的结构模型表表，，，，，，糖供体结合口袋邻近处的疏水区域参加了SetA的底物选择。。。。。随后，，，，，，钻研人员将SetA选择性识此外S/T-X-L-P/G守旧性序列，，，，，，开发为O-glucosylation 标签 (GlcTag)，，，，，，实现了真核生物蛋白的位点特异性O-糖基化建饰。。。。。

综上所述，，，，，，这项钻研开发了化学酶法象征战术，，，，，，实现了对军团菌效应蛋白糖基转移酶SetA的底物蛋白鉴定，，，，，，揭示了SetA的底物建饰拥有S/T-X-L-P/G序列选择性。。。。。初次发现了原核生物中广谱O-糖基化系统，，，，，，为糖蛋白的人为合成提供了有力的工具。。。。。该化学酶法象征富集战术可推广利用到多种糖基转移酶的底物蛋白鉴定，，，，，，推进更多的糖合成工具酶的开发，，，，，，进而实现各类糖蛋白的精准合成。。。。。

生射中心博士钻研生高玲为本论文第一作者。。。。。陈兴是通讯联系作者。。。。。生射中心、北大化学院来鲁华，，，，，，北京性命科学钻研所邵峰钻研员和生射中心、北大生科院肖俊宇参加了该钻延祝。。。。该钻研工作得到了国度天然科学基金委、科技部、生射中心的赞助。。。。。

原文标题：

Legionella effector SetA as a general O-glucosyltransferase for eukaryotic proteins