?乐投letou生物报路:逆转座子是一类能够通过“复造-粘贴”的方式在基因组上产生跳跃的DNA元件。。。。。。。。R2是低等真核生物中宽泛存在的一种逆转座子。。。。。。。。它们专一性地“寄生”在宿主基因组的28S核糖体DNA中，，，，，，借助宿主基因的启动子，，，，，，合成自身的mRNA和蛋白质并组装形成R2复合物（“复造”过程）；；；；；；R2复合物可再次鉴别宿主28S核糖体DNA上的专一性位点，，，，，，通过核酸酶（endonuclease, EN）结构域切开DNA双链，，，，，，再通过逆转录酶（reverse transcriptase, RT）结构域逆转录合成cDNA，，，，，，将R2基因序列沉新整合到宿主基因组上（“粘贴”过程），，，，，，实现“增殖”。。。。。。。。

有趣的是，，，，，，逆转座子等可移动的DNA元件在基因组上跳跃的过程中，，，，，，极大地丰硕了基因组的组成，，，，，，被以为在基因组进化的过程中表演着沉要的作用。。。。。。。。因而，，，，，，理解逆转座子在基因组上跳跃的分子机造将有助于思虑“乐投letou基因组从哪里来、若何来”的问题。。。。。。。。此表，，，，，，利用逆转座子在基因组上跳跃的性质，，，，，，开发新的核酸把持工具，，，，，，将拥有巨大的利用远景（Science，，，，，， 2023）。。。。。。。。

图1. 逆转座子通过“复造-粘贴”在基因组上跳跃的示意图

2023年6月9日，，，，，，刘好汉课题组在《细胞》（Cell）杂志在线颁发了题为“R2逆转座子中结构性RNA组分监督挨次性DNA切割”（Structural RNA components supervise the sequential DNA cleavage in R2 retrotransposon）的钻研论文。。。。。。。。报路了R2逆转座子的mRNA中存在两段结构性的RNA，，，，，，共同调控DNA双链的挨次性切割，，，，，，从而保障逆转座的正确进行。。。。。。。。此表，，，，，，课题组还将第二类内含子（Group II intron）、LINE-1逆转座子与R2逆转座子进行了比力，，，，，，总结了生物大分子进化过程中，，，，，，以RNA为主导逐步过渡到以蛋白质为主导的进化趋向，，，，，，提出了新鲜的见解。。。。。。。。

课题组发现, 位于R2 mRNA 3’端非翻译区的RNA（3’-RNA）在R2蛋白质切割DNA双链的过程中，，，，，，阐发出推进第一条链切割、抑造第二条链切割的作用；；；；；；位于5’端翻译区的RNA（5’-RNA）则阐发出降低第一条链切割、激活第二条链切割的作用；；；；；；而当5’-RNA与3’-RNA同时存在时，，，，，，总是阐发出3’-RNA的调控作用，，，，，，并且齐全抑造第二条链的切割。。。。。。。。为了进一步理解其中的分子机造，，，，，，课题组解析了R2逆转座子在3’-RNA结合状态和5’-RNA结合状态的高分辨结构。。。。。。。。在3’-RNA结合状态中，，，，，，DNA底物被蛋白质特异性鉴别，，，，，，3’-RNA主题区域结合在蛋白质的RNA结合（RNA binding, RB）结构域上。。。。。。。。在5’-RNA结合状态中，，，，，，5’-RNA出现出复杂的“三爪（three-claw）”结构，，，，，，缜密的包裹住蛋白质主题。。。。。。。。值妥贴心的是，，，，，，5’-RNA的其中一个爪（Claw3）同样结合在RB结构域上，，，，，，且生化分析批注，，，，，，Claw3对激活第二条链切割是必要的。。。。。。。。

图2. 3’-RNA结合状态（左）和5’-RNA结合状态（右）的复合物结构

此表，，，，，，课题组用一段衔接序列将5’-RNA与3’-RNA衔接成一条RNA，，，，，，设计了R2全长mRNA的模拟物（L-RNA），，，，，，并获得了R2逆转座子在L-RNA结合状态的结构。。。。。。。。在这个结构中，，，，，，5’-RNA同样以“三爪”的大局与蛋白质主题缜密结合，，，，，，但由于3’-RNA的挤占，，，，，，起激活第二条链切割作用的Claw3未能与RB结构域结合。。。。。。。。浚？？？？？翁庾榉⑾郑，，，，L-RNA中3’-RNA与蛋白质RB结构域的结合将抑造第二条链的切割，，，，，，但当提供dNTP作为原料，，，，，，使逆转录能够产生后，，，，，，3’-RNA在作为逆转录模板的过程中逐步从RB结构域上解离下来，，，，，，5’-RNA得以与RB结构域结合，，，，，，从而激活第二条链的切割。。。。。。。。

图3. L-RNA结合状态的复合物结构与RNA监督DNA双链挨次性切割的示意图

综合以上分析，，，，，，课题组总结得出了R2逆转座子在基因组上跳跃的分子机造：R2蛋白质特异性鉴别28S核糖体DNA序列后，，，，，，蛋白质RB结构域首先结合R2 mRNA上的3’-RNA，，，，，，推进第一条DNA链的切割，，，，，，同时抑造第二条链的切割，，，，，，仅露出出第一条链的3’-OH作为引物，，，，，，从mRNA的3’端肇始逆转录过程（Target-primed reverse transcription, TPRT），，，，，，随着逆转录的进行，，，，，，位于mRNA 3’端的3’-RNA逐步从蛋白质RB结构域解离，，，，，，对第二条链切割的抑造作用得以开释，，，，，，R2 mRNA上的5’-RNA与RB结构域的结合进一步激活了第二条链的切割。。。。。。。。由此，，，，，，位于mRNA两端的结构性RNA共同监督了DNA双链的挨次性切割。。。。。。。。这种缜密的挨次性切割保险了依赖宿主基因表白元件的R2逆转座子进杏装有效的增殖”，，，，，，从而在28S核糖体DNA中不休产生有活性的拷贝。。。。。。。。

图4. R2逆转座子在基因组上产生跳跃的分子机造与意思

有趣的是，，，，，，课题组将低等真核生物的R2逆转座子与其祖先（原核生物第二类内含子，，，，，，Group II intron）和哺乳动物中的LINE-1逆转座子进行了比力，，，，，，发此刻Group II intron向R2逆转座子及进一步向LINE-1逆转座子进化的过程中，，，，，，RNA的结构性组分逐步削减并被编码区域所取代，，，，，，并且催化职能逐步从以RNA为主导过渡到以蛋白质为主导，，，，，，为理解生物大分子进化提供了新的视角。。。。。。。。此表，，，，，，LINE-1逆转座子在哺乳动物基因组中宽泛存在且拥有逆转座活性，，，，，，为基因组提供进化驱动力的同时，，，，，，也为基因组不变性和基因表白带来了沉大的影响。。。。。。。。对R2逆转座子在基因组上跳跃的分子机造的钻研，，，，，，将启发我们思虑LINE-1逆转座子这类“自私的基因”与基因组之间精彩的博弈过程。。。。。。。。

图5.逆转座子中RNA与蛋白质共进化趋向的示意图

清华大学性命学院刘好汉助理教授和副钻研员王家为本文共同通讯作者；；；；；；高精尖结构中心卓越学者邓谱涓博士和清华大学性命学院2021级博士生谭顺青为本文共同第一作者；；；；；；清华大学性命学院本科生杨启羽，，，，，，2020级博士生朱汉舟，，，，，，中国科学院动物钻研所王皓毅钻研员及博士生傅良政、吴亚超，，，，，，清华大学性命学院张强锋副教授及已出站博士后孙磊（现山东大学性命科学学院钻研员），，，，，，清华大学性命学院吝易助理教授及博士生包章彬均参加了本文钻研。。。。。。。。美国Broad钻研所张锋教授和Max E. Wilkinson博士在原子模型搭建中提供了贵重的建议。。。。。。。。清华大学冷冻电镜平台为本钻研提供了设备和技术支持。。。。。。。。本钻研得到了中华人民共和国农业村落部、科技部2030-“脑科学与类脑钻延妆沉大项目、国度沉点研发打算、国度天然科学基金、刘好汉尝试室启动经费、中国博士后科学基金和中国科学院战术先导专项的支持。。。。。。。。