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BrdU细胞增殖检测试剂盒
BrdU细胞增殖检测试剂盒

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BrdU细胞增殖检测试剂盒

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货号：ZK-PL4012

描述：BrdU检测试剂盒用于细胞和组织切片的细胞增殖检测。。。。。。BrdU(5-Bromo-2-deoxyUridine)，，，，，，，，即5-溴脱氧尿嘧啶核苷，，，，，，，，是胸腺嘧啶核苷(T)类似物，，，，，，，，检测道理为BrdU能够通过竞争代替胸腺嘧啶核苷T掺入DNA合成期(S期)。。。。。。当处于旺盛割裂的细胞掺入BrdU后，，，，，，，，利用抗BrdU抗体和抗体衔接酶或荧光素作为批示系统，，，，，，，，即可检测出含有BrdU的细胞，，，，，，，，结合其它细胞象征物进行双沉象征，，，，，，，，可判断出增殖细胞的种类、增殖速度等，，，，，，，，对钻研细胞动力学有沉要意思。。。。。。BrdU经活体注射或细胞造就时进入组织细胞，，，，，，，，掺入DNA定位正确，，，，，，，，可有效反映S期细胞新合

成DNA的水平，，，，，，，，并且受细胞内表环境影响。。。。。。，，，，，，，象征不会迷失。。。。。。

组成:

破膜液	30 mL	4℃
封关液（3%BSA）	30 mL	4℃
4%多聚甲醛	30 mL	常温
1M HCl	30 mL	4℃
Anti-BrdU (mouse mAb)	50 μL	-20℃
有效期一年

操作步骤:

细胞样品：

1. 细胞筹备：提前筹备细胞爬片，，，，，，，，确保细胞状态正常，，，，，，，，贴壁优良；；；；；

2. BrdU孵育：细胞经含BrdU的造就基于造就箱中避光孵育一按功夫，，，，，，，，BrdU浓度及细胞孵育功夫凭据细胞种类分歧，，，，，，，，建议预尝试摸索最佳前提。。。。。。当苦衷项中已测试细胞尝试前提可供参考；；；；；

3. 细胞固定：上述经BrdU孵育的细胞爬片，，，，，，，，PBS洗3次，，，，，，，，每次5min。。。。。。向孔板内参与1mL 4%多聚甲醛覆盖细胞，，，，，，，，室温固定20-30min。。。。。。PBS洗3次，，，，，，，，每次5min；；；；；

4. 通透：向孔板内滴加破膜液覆盖细胞处置8-10min，，，，，，，，PBS洗3次，，，，，，，，每次5min；；；；；

5. 细胞核染色（可。。。。。。

若后续白光检测，，，，，，，，则用苏木素染细胞核：向孔板内滴加苏木素染液室温染色5min，，，，，，，，吸弃苏木素染液，，，，，，，，PBS洗3次，，，，，，，，每次5min；；；；；

若后续荧光检测，，，，，，，，则用DAPI染细胞核：向孔板内滴加DAPI染液室温染色5min，，，，，，，，吸弃DAPI染液，，，，，，，，PBS洗3次，，，，，，，，每次5min；；；；；

6. 再固定：向孔板内滴加4%多聚甲醛室温孵育10min，，，，，，，，PBS洗3次，，，，，，，，每次5min；；；；；

7. 酸化：向孔板内滴加1M HCl覆盖细胞，，，，，，，，37℃处置10min，，，，，，，，PBS洗3次，，，，，，，，每次5min；；；；；

8. 后固定：再次向孔板内滴加4%多聚甲醛室温孵育10min，，，，，，，，PBS洗3次，，，，，，，，每次5min；；；；；

9. 封关：向孔板内滴加封关液（3% BSA）室温孵育30min。。。。。。吸弃封关液，，，，，，，，不要洗濯；；；；；

10. Anti-BrdU抗体孵育：向孔板内滴加anti-BrdU一抗工作液覆盖细胞，，，，，，，，4℃孵育过夜。。。。。。吸弃anti-BrdU一抗工作液，，，，，，，，PBS洗3次，，，，，，，，每次5min；；；；；

11. 二抗孵育：向孔板内滴加二抗工作液覆盖细胞，，，，，，，，室温孵育1h。。。。。。吸弃二抗工作液，，，，，，，，PBS洗3次，，，，，，，，每次5 min。。。。。。把稳，，，，，，，，若是用荧光象征的二抗，，，，，，，，孵育及洗涤时均需避光；；；；；

12. 封片及镜检：

若是HRP象征的二抗(C1308)，，，，，，，，则用DAB显色试剂对细胞样品进行显色，，，，，，，，脱水，，，，，，，，通明，，，，，，，，用尖头镊子轻轻将爬片挑起，，，，，，，，倒扣在干净的载玻片上封片，，，，，，，，显微镜观察；；；；；

若是荧光象征的二抗，，，，，，，，在干净载玻片上滴加抗荧光衰减封片剂（C1210），，，，，，，，用尖头镊子轻轻将爬片挑起，，，，，，，，倒扣在载玻片上封片，，，，，，，，荧鲜明微镜观察；；；；；

组织切片样品：

1. 动物筹备：需提前筹备尝试动物，，，，，，，，并进行体内BrdU象征。。。。。。体内象征后凭据尝试必要进行取材、固定及造备石蜡切片；；；；；

2. 组织石蜡切片脱蜡复水；；；；；

3. 建复：组画笔画圈圈住组织，，，，，，，，将切片浸没在抗原建复液中，，，，，，，，微波加热建复。。。。。。天然冷却；；；；；

4. 细胞核染色（可。。。。。。

若后续白光检测，，，，，，，，则用苏木素染细胞核：切片入苏木素染液室温染色5min，，，，，，，，PBS洗3次，，，，，，，，每次5min；；；；；

若后续荧光检测，，，，，，，，则用DAPI染细胞核：向组织上滴加DAPI染液室温染色5min，，，，，，，，倾去DAPI染液，，，，，，，，切片经PBS洗3次，，，，，，，，每次5min；；；；；

5. 再固定：向组织上滴加4%多聚甲醛室温孵育10min，，，，，，，，PBS洗3次，，，，，，，，每次5min；；；；；

6. 酸化：向切片上滴加1 M HCl覆盖组织，，，，，，，，37℃处置10min，，，，，，，，PBS洗3次，，，，，，，，每次5min；；；；；

7. 后固定：再次向切片上滴加4%多聚甲醛覆盖组织室温孵育10min，，，，，，，，PBS洗3次，，，，，，，，每次5min；；；；；

8. 内源性过氧化物酶淬灭（可。。。。。。合蚯衅系渭3% H2O2室温孵育25-30min，，，，，，，，去除内源性过氧化物酶。。。。。。随后切片经PBS洗3次，，，，，，，，每次5min；；；；；

9. 封关：向切片上滴加封关液（3% BSA）覆盖组织，，，，，，，，室温孵育30min。。。。。。去除封关液，，，，，，，，不要洗濯；；；；；

10. Anti-BrdU抗体孵育：向切片上滴加anti-BrdU一抗工作液覆盖组织，，，，，，，，4℃孵育过夜。。。。。。去除anti-BrdU一抗工作液，，，，，，，，PBS洗3次，，，，，，，，每次5min；；；；；

11. 二抗孵育：向切片上滴加二抗工作液覆盖组织，，，，，，，，室温孵育1h。。。。。。去除二抗工作液，，，，，，，，PBS洗3次，，，，，，，，每次5 min。。。。。。把稳，，，，，，，，若是用荧光象征的二抗，，，，，，，，孵育及洗涤时均需避光；；；；；

12. 封片及镜检：

若是HRP象征的二抗(C1308)，，，，，，，，则用DAB显色试剂对组织切片进行显色，，，，，，，，脱水，，，，，，，，通明，，，，，，，，封片后显微镜观察；；；；；

若是荧光象征的二抗，，，，，，，，则滴加抗荧光淬灭封片剂（C1210）封片后荧鲜明微镜观察。。。。。。

了局观察

若是用HRP象征的二抗检测，，，，，，，，细胞核呈深蓝色，，，，，，，，增殖细胞呈棕色。。。。。。若是是荧光象征的二抗，，，，，，，，细胞核呈蓝色荧光（Ex=358 nm，，，，，，，，Em=461 nm），，，，，，，，增殖细胞为对应二抗的荧光。。。。。。

当苦衷项

1. 对于细胞爬片样品，，，，，，，，BrdU的使用浓度和处置功夫与细胞种类有关。。。。。。通常来说，，，，，，，，处置肿瘤细胞所需浓度和功夫都较低，，，，，，，，成纤维细胞或上皮细胞等增殖较慢的细胞必要提高浓度并耽搁作用功夫，，，，，，，，建议浓度领域为20-100μM，，，，，，，，作用功夫为40min-4h，，，，，，，，可凭据具体细胞的种类进行摸索调整。。。。。。

下表为测试的常用细胞处置浓度及功夫，，，，，，，，仅供参考。。。。。。

细胞	BrdU浓度（μM）	孵育功夫（min）
A549	40	40
Hela	40	40
NRK-52e	40	40
SKOV3	80	120
H9C2	40	40

2. 为了您的安全和健全，，，，，，，，请穿尝试服并戴一次性手套操作。。。。。。

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