?细胞膜蛋白提取试剂盒

货号：ZK-PL3520

规格：50次 100次

描述：

本试剂盒可能从哺乳动物新鲜或冻存的组织块、贴壁或悬浮细胞中造备细胞膜与胞内质膜组分。。。。。其怪异的试剂成分与优化的造备规划使胞膜造备过程单一易行，，，，，，无需特殊设备和超速离心，，，，，，可在1幼时内实现。。。。。利用本试剂盒造备的胞膜是细胞膜和细胞器膜如线粒体、内质网及质膜的混合物。。。。。造备得到的产品纯度可胜任后续的免疫沉淀、蛋白印迹、2-D gel、酶活性检测和受体分析等尝试。。。。。

组成:

（以下是50次规格用量）

CER (Cytosol Extraction Reagent)       25ml

MER (Membran Extraction Reagent)       2.5ml

Suspension Buffer 10ml

贮存：

各组分4 oC 有效期12个月

操作步骤：

一． 样本预处置：

网络细胞：（在每一次造备过程中，，，，，，使用等量的细胞数将显著提高后续检测了局的一致性，，，，，，因而建议在造备前对细胞正确计数）

1. 贴壁细胞：用PBS缓冲液冲刷细胞平皿，，，，，，用胰蛋白酶消化细胞。。。。。800g离心5-10分钟，，，，，，弃上清，，，，，，用PBS缓冲液沉悬洗涤细胞并再次离心网络细胞。。。。。

2. 悬浮细胞：800g离心5-10分钟，，，，，，弃上清。。。。。用PBS缓冲液沉悬洗涤细胞并再次离心网络细胞。。。。。

以下造备过程要在4 oC或冰水浴中进行

二． 组织细胞匀浆裂解

1. 细胞匀浆裂解

向每1x107个细胞或每100?l（细胞离心后的体积）细胞沉淀中参与500?lCER试剂，，，，，，震荡沉悬，，，，，，冰浴2分钟。。。。。将细胞悬液转移到冰预冷的玻璃匀浆器内，，，，，，在冰水浴中高低手动匀浆20-30次。。。。。

把稳：此破碎细胞步骤为关键环节。。。。。要使用1-3ml幼容积玻璃匀浆器，，，，，，须选用间隙缜密的研杵，，，，，，其特点是将研杵插入匀浆器套管后，，，，，，可提起研杵而套管不会脱落。。。。。有效研磨是高低推拉而不是旋转。。。。。破碎成效与细胞类型有关，，，，，，可在相差显微镜下查抄，，，，，，未裂解细胞应幼于5%。。。。。

2. 组织块匀浆裂解：

取250mg哺乳动物新鲜或-80 oC冻存组织块放入冰预冷的玻璃匀浆器内，，，，，，参与500?lCER试剂。。。。。用研杵捣碎组织块，，，，，，高低手动匀浆20次，，，，，，冰浴10分钟，，，，，，而后高低手动匀浆7次。。。。。

把稳：与造就细胞出格是贴壁细胞相比，，，，，，组织块中的细胞在匀浆时较易破碎，，，，，，因而并非必须选择间隙缜密的研杵。。。。。若是研杵与套管过于缜密，，，，，，会使组织匀浆难题，，，，，，可选用研杵与套管稍松的匀浆器，，，，，，破碎成效与组织细胞类型有关，，，，，，可在相差显微镜下查抄，，，，，，未裂解细胞应少于5%。。。。。

三、 粗提物造备：

取约500?l裂解物，，，，，，转移到新的离心管中，，，，，，800g ,4oC离心5分钟。。。。。上清为胞膜-胞浆混合物。。。。。

四、 胞膜胞浆造备：

1）将步骤三获得的上清转移到新的离心管中，，，，，，估计上清的体积；；；；；；；；

 2）参与上清液1/10体积的MER与上清液混合，，，，，，冰浴5分钟；；；；；；；；

3）14,000rpm，，，，，，4oC离心

30分钟；；；；；；；；

4）沉淀为胞膜组分，，，，，，含有细胞膜和亚细胞器碎片，，，，，，可短暂离心除尽液体，，，，，，用50-100?l Suspension Buffer沉悬备用或用RIPA裂解胞膜；；；；；；；；做WB

时膜蛋白分子量100KD以上的建议用较强的蛋白提取试剂如加强的RIPA，，，，，，便于获取溶化度低的膜蛋白，，，，，，具体规划凭据试验目简直定。。。。。

注明：

1.Suspension Buffer 不含去垢剂，，，，，，沉悬于Suspension Buffer 中的胞膜或胞核组分呈不溶化状态是正常的，，，，，，用户可用自备溶液沉悬胞膜或胞核成

分。。。。。若是进行蛋白印迹、2-D get等尝试，，，，，，用户可用SDS上样缓冲直接裂解细胞膜或细胞核成分。。。。。对于进行免疫共沉淀尝试来说，，，，，，可用RIPA裂解液

沉悬胞膜。。。。。

2.试剂盒各组分中未增长蛋白酶抑造剂，，，，，，可自行选择增长