产品名称： 猪乙型脑炎病毒ELISA试剂盒

货号： ZK-P6460

英文名称: Porcine B encephalitis antibody

品牌：乐投letou生物ZIKER；；；；；

检测步骤：酶联免疫分析检测法；；；；；

规格：48T/96T；；；；；

包装：盒；；；；；

有效期：6个月；；；；；

保留温度： 2-8℃;

利用领域：仅供科研钻研尝试使用，，，，，，，，不成用于临床诊断使用；；；；；

可检测样品大局：血清/血浆/组织匀浆/细胞造就上清/有关生物液体。。。。。

一、检测领域、 OD值：具体请征询在线客服 ，，，，，，，，或者来电索要具体说明书！

二、需自备试剂和器材

1． 尺度规格酶标仪。。。。。

2． 自动洗板机。。。。。

3.  37℃恒温箱。。。。。

4． 系列可调节移液器及吸头，，，，，，，，一次检测样品较多时，，，，，，，，最好用多通路移液器。。。。。

5． 使用中性 PBS 或 TBS 作为洗涤液。。。。。

6  蒸馏水。。。。。

7. 吸水纸。。。。。

三、样品的筹备和保留

样品若是不立即分析，，，，，，，，应分装后冷冻保留，，，，，，，，且预防反复冻融。。。。。

细胞造就、组织匀浆、体液——离心去除沉淀，，，，，，，，立即分析或分装后-20℃冷冻保留。。。。。

1.  血清：使用不含热原和内毒素的试管，，，，，，，，操作过程中预防任何细胞刺激，，，，，，，，网络血液后，，，，，，，，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速幼心地分离。。。。。

2.  血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。。。。。3000转离心30分钟取上清。。。。。

3.  细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。。。。。

4.  组织匀浆：切割标本后，，，，，，，，称取沉量。。。。。参与肯定量的PBS，，，，，，，，PH7.4。。。。。用液氮迅速冷冻保留备用。。。。。标本消融后依然维持2-8℃的温度。。。。。参与肯定量的PBS（PH7.4），，，，，，，，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。。。。。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。。。。。仔细网络上清。。。。。分装后一份待检测，，，，，，，，其余冷冻备用。。。。。

5.  保留：若是样本网络后不实时检测，，，，，，，，请按一次用量分装，，，，，，，，冻存于-20℃，，，，，，，，超过2个月冻存于-80℃，，，，，，，，预防反复冻融，，，，，，，，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。。。。。

四、操作当苦衷项

1.  试剂盒保留在2-8℃，，，，，，，，使用前室温平衡20分钟。。。。。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，，，，，，，，这属于正常景象，，，，，，，，水浴加热使结晶齐全溶化后再使用。。。。。

2.  尝试中不用的板条应立即放回自封袋中，，，，，，，，密封（低温干燥）保留。。。。。

3.  浓度为0的S0号尺度品即可视为阴性对照或者空缺；；；；；依照说明书操作时样本已经稀释5倍，，，，，，，，最终了局乘以5才是样本现实浓度。。。。。

4.  严格依照说明书中表明的功夫、加液量及挨次进行温育操作。。。。。

5.  所有液体组分使用前充分摇匀。。。。。

五、洗板步骤

1、手工洗板：甩尽孔内液体，，，，，，，，每孔加满洗涤液，，，，，，，，静置1min后甩尽孔内液体，，，，，，，，在吸水纸上拍干，，，，，，，，如此洗板5次。。。。。

2、自动洗板机：每孔注入洗液350μL，，，，，，，，浸泡1min，，，，，，，，洗板5次。。。。。

六、尝试具体操作法式

1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，，，，，，，，渣滓板条用自封袋密封放回4℃。。。。。

2.  设置尺度品孔和样本孔，，，，，，，，尺度品孔各加分歧浓度的尺度品50μL；；；；；样本孔加待测样本50μL。。。。。

3.  样本孔先加待测样本10μL，，，，，，，，再加样本稀释液40μL；；；；；空缺孔不加。。。。。

4.  除空缺孔表，，，，，，，，尺度品孔和样本孔中每孔参与辣根过氧化物酶（HRP）象征的检测抗体100μL，，，，，，，，用封板膜封住反映孔，，，，，，，，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。。。。。

5.  弃去液体，，，，，，，，吸水纸上拍干，，，，，，，，每孔加满洗涤液，，，，，，，，静置1min，，，，，，，，甩去洗涤液，，，，，，，，吸水纸上拍干，，，，，，，，如此沉复洗板5次（也可用洗板机洗板）。。。。。

6.  每孔参与底物A、B各50μL，，，，，，，，37℃避光孵育15min。。。。。

7.  每孔参与终止液50μL，，，，，，，，15min内，，，，，，，，在450nm波利益测定各孔的OD值。。。。。

七、了局判断:

绘造尺度曲线：在Excel工作表中，，，，，，，，以尺度品浓度作横坐标，，，，，，，，对应OD值作纵坐标，，，，，，，，绘造出尺度品线性回归曲线，，，，，，，，按曲线方程推算各样本浓度值。。。。。