WESTERN BLOT是以电泳分离组分，，，，，，，，将其从凝胶转移到一种固相支持体，，，，，，，，继之以针对特定氨基酸序列的特异性抗体作为探针检测主张蛋白的一种分子生物学技术。。。。。。。  

免疫印迹(immunoblotting)又称蛋白质印迹(Western blotting)，，，，，，，，它是凭据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的步骤。。。。。。。该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。。。。。。。由于免疫印迹拥有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，，，，，，，，现已成为蛋白分析的一种通例技术。。。。。。。免疫印迹常用于鉴定某种蛋白，，，，，，，，并能对蛋白进行定性和半定量分析。。。。。。。

丽江乐投letou生物为您提供全套免疫印迹(immunoblotting)技术服务，，，，，，，，全数尝试皆使用高质量试剂实现：

一、重要尝试步骤如下：  

1. 蛋白质抽提
a.尝试对象为组织样品，，，，，，，，取适量（250~500mg）新鲜组织样品或正确保留的组织样品，，，，，，，，加1ml含蛋白酶抑造剂的总蛋白抽提试剂（或核蛋白抽提试剂），，，，，，，，匀浆后抽提总蛋白（或核蛋白）。。。。。。。

b.尝试对象为细胞样品，，，，，，，，每份样品取1×106～1×107细胞，，，，，，，，PBS洗濯细胞，，，，，，，，去PBS加0.1ml~1ml含蛋白酶抑造剂的总蛋白抽提试剂（或核蛋白抽提试剂）抽提总蛋白（或核蛋白）。。。。。。。  

2. 蛋白质定量
按KCTMBCA蛋白质定量试剂盒操作注明操作，，，，，，，，测定样品浓度。。。。。。。

3. 变性聚丙烯酰胺不陆续凝胶电泳(SDS-PAGE)  
将筹备好的样品液和生物素象征的蛋白质分子量尺度别离上样，，，，，，，，尺度加进第一个孔中，，，，，，，，电泳分离蛋白。。。。。。。

4. 蛋白质转移到硝酸纤维膜或PVDF膜
按Bio-Rad蛋白转移装置注明组装滤纸凝胶纤维素夹层，，，，，，，，30mA恒流前提下，，，，，，，，4°C转移过夜。。。。。。。

5. 膜的封关和抗体孵育
a. 膜在5％BSA溶液中室温孵育1幼时以封关膜上的非特异结合。。。。。。。
b. 封关过的膜参与一级抗体室温孵育1.5幼时，，，，，，，，抗原抗体结合。。。。。。。  
c. 参与HRP象征的二级抗体以结合一级抗体及HRP象征的抗生物素抗体以结合分子量尺度，，，，，，，，室温孵育膜1幼时。。。。。。。参与HRP象征的GAPDH抗体可同时检测GAPDH含量。。。。。。。

6. 了局检测
 化学发光法检测，，，，，，，，膜与化学发光底物孵育，，，，，，，，经X胶片曝鲜明影。。。。。。。图片扫描保留为电脑文件，，，，，，，，并用ImageJ分析软件将图片上每个特异条带灰度值的数字化。。。。。。。

7. 数据分析
 主张蛋白的灰度值除以内参GAPDF的灰度值以校对误差，，，，，，，，所得了局代表某样品的主张蛋白相对含量。。。。。。。

8. 提供尝试汇报
蕴含具体的尝试步骤及免疫印迹尝试了局的有关图表。。。。。。。

二、客户方需提供：

1、 第一抗体(建议客户定购国表公司的一抗，，，，，，，，以国表文件中利用的有关第一抗体为佳。。。。。。。
 如Cell signaling technology, Cayman Chemical, Santan Cruz, Zymed等驰名抗体公司。。。。。。。)

2、 预尝试样本

3、 正式尝试样本
 同时但愿客户能提供相应的布景资料以利尝试顺利实现，，，，，，，，布景资料蕴含：样本描述，，，，，，，，主张蛋白有关资料，，，，，，，，必要的有关尝试设计内容如阳性对照等等。。。。。。。

三、公司方提供：

1、 预尝试了局

2、 正式尝试了局

如客户只必要进行预尝试钻研，，，，，，，，我方可只代理预尝试业务并提供了局。。。。。。。

乐投letou，，，，，，，，竭诚为您服务！
征询热线：0755-33164177/13924667705。。。。。。。